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2019新型冠状病毒核酸检测试剂注册技能审评要点
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附表:

受试者编号

年事

性别

样本范例

临床诊断配景信息

确诊/扫除

后果

稽核试剂检测后果

比拟办法检测后果

备注

通道1

通道2

判断

通道1

通道2

判断

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

 

备注:

a)确诊病例应明白确诊/扫除。 

b)受试者编号应独一可溯源。

 

 

一、实用范畴

2019新型冠状病毒核酸检测试剂用于对咽拭子、鼻咽拭子、肺泡灌洗液、痰液、呼吸道洗液、抽吸液或其他呼吸道排泄物等样本中的2019新型冠状病毒核酸举行体外定性检测。本审评要点实用于举行初次注册报告的产品。

二、功能评价:

企业应提交在切合质量办理系统的消费情况下消费的试剂盒举行的一切功能验证的研讨材料,包罗详细研讨办法、实行方案、实行数据、统计剖析等细致材料。发起偏重对以下剖析功能举行研讨。

1.核酸(RNA)提取/纯化功能

在举行靶核酸检测前,应有核酸(RNA)提取/纯化步调。该步调的目标除最少量分散出目标RNA外,还应有响应的纯化作用,尽大概去除PCR克制物。无论检测试剂能否含有RNA分散/纯化的组分,企业都应联合检测试剂的特征,对共同利用的核酸提取试剂/办法的提取服从、提取核酸纯度等做充实的验证,提供细致的验证材料。

2.最低检测限

(1)最低检测限确实定

将含有2019新型冠状病毒的真实临床样本/含有该病毒RNA片断的假病毒颗粒梯度浓缩于(与实用样本分歧的)得当基质中,用于举行最低检测限研讨,应接纳迷信的办法标定病毒滴度。每个浓度梯度最少反复三次检测,以100%可检出的最低浓度程度作为估量检测限,在此浓度左近制备多少梯度浓度样品,每个浓度至多反复20次检测,将具有90%~95%阳性检出率的最低浓度程度作为确定的最低检测限。

在举行最低检测限确实定时,应至多包罗差别泉源的三个具有代表性的2019新型冠状病毒样本,举行系列梯度浓缩。

(2)最低检测限的验证

选择差别泉源的至多3个病毒样本(与最低检测限确定差别的病毒样本)在最低检测限浓度程度举行验证,应到达90%~95%阳性检出率。

应提供细致的病毒液滴度确实定办法及验证后果。

3.差别地区病毒样本包涵性的验证

至多验证包罗具偶然间和地区特性性的10个差别泉源的病毒样本(阳性临本或分散培育物),应包罗最低检出限、反复性等功能的验证,病毒样本的滴度应接纳迷信公道的办法举行标定。

4.剖析特异性

(1)交织反响验证包罗:

①地方性人类冠状病毒(HKU1,OC43,NL63和229E)、SARS冠状病毒、MERS冠状病毒;

H1N1(新型甲型H1N1流感病毒(2009)、季候性H1N1流感病毒)、H3N2、H5N1、H7N9,乙型流感Yamagata、Victoria,呼吸道合胞病毒A、B型,副流感病毒1、2、3型,鼻病毒A、B、C组,腺病毒1、2、3、4、5、7、55型,肠道病毒A、B、C、D组,人世质肺病毒、人病毒、EB病毒、麻疹病毒、人大小胞病毒、轮状病毒、诺如病毒、腮腺炎病毒、水痘-带状疱疹病毒;

肺炎支原体、肺炎衣原体;

军团菌、百日咳杆菌、流感嗜血杆菌、金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌、化脓性链球菌、肺炎克雷伯菌、结核分枝杆菌;  

烟曲霉、白色念珠菌、平滑念珠菌、复活隐球菌等。

发起在病毒和细菌熏染的医学相干程度举行交织反响的验证。通常,细菌熏染的浓度程度为106 cfu/ml或更高,病毒为105 pfu/ml或更高,提供一切用于交织反响验证的病毒和细菌的泉源、种属/型别和浓度确认等实验材料。

②人类基因组DNA。

(2)内源/外源物质搅扰

应依据所收罗样本范例,针对大概存在的搅扰状况举行验证。发起请求人在每种搅扰物质的潜伏最大浓度(“最差条件”)条件下举行评价,在病毒临界阳性程度举行搅扰实验验证。检测的潜伏搅扰物包罗样本中的原有物质(如血液、鼻腔排泄物、粘液及用于缓解淤血、鼻噪、安慰或哮喘和过敏症状的鼻腔和咽喉药物、抗菌药物、抗病毒药物等)及在样本收罗和制备时期引入的物质。

表1 保举用于搅扰实验的物质

物质

活性身分

粘卵白

纯化粘卵白

血液(人类)

 

鼻腔喷雾剂或滴鼻剂

苯福林、羟甲唑啉、氯化钠(含防腐剂)

鼻用皮肤类固醇

倍氯美松、地塞米松、氟尼缩松、曲安奈德、布地奈德、莫米松、氟替卡松

过敏性症状缓解药物

盐酸组胺

抗病毒药物

α-搅扰素、扎那米韦、力把韦林、奥司他韦、帕拉米韦、洛匹那韦、利托那韦、阿比多

抗生素

左氧氟沙星、阿奇霉素、头孢曲松、美罗培南

满身性抗菌药

妥布霉素

5.精细度

企业应对精细度目标,如尺度差或变异系数等的评价尺度做出公道要求。模仿样本并不克不及表现临床样本大概带来的一切变异要素,因而精细度评价中应同时包括多少临床样本,且精细度评价实验应包括核酸分散/纯化步调。针对本类产品的精细度评价次要包罗以下要求。

(1)对大概影响检测精细度的次要变量举行验证,除检测试剂(包罗核酸分散/纯化组分)自己的影响外,还应对剖析仪、操纵者、所在、检测轮次等要素举行相干的验证。

(2)设定公道的精细度评价周期,比方:为期至多20天的检测大概为期至多5天的检测,详细方案可参考EP文件举行。从而对批内/批间、日内/白天以及差别操纵者之间的精细度举行综合评价。

(3)用于精细度评价的人工模仿样品和临床样本均应至多包括3个程度:阴性样品、临界阳性样品、(中或强)阳性样品,并依据产品特征设定得当的精细度要求,临床样本精细度评价中的每一次检测均应从核酸提取开端。

①阴性样本:待测物浓度低于最低检测限或为零浓度,阴性检出率应为100%(n≥20)。

②临界阳性样本:待测物浓度略高于试剂盒的最低检测限,阳性检出率应≥95%(n≥20)。

③中/强阳性样本:待测物浓度呈中度到强阳性,阳性检出率为100%且CV≤10%(n≥20)。

6.提供企业参考品验证材料:依据次要原质料研讨材料中的企业参考品设置状况,接纳三批产品对企业参考品举行查验并提供细致的实行数据。

7.其他需留意题目

关于实用多个机型的产品,应提供产品阐明书【实用机型】项中所列的一切型号仪器的功能评价材料。差别样本范例应辨别举行功能评价验证.

三、注册查验

应提供切合产品技能要求的、在具有响应医疗东西查验资质和承检范畴的医疗东西查验机构举行的产品查验陈诉,应提供一连3个消费批次样品的查验及格陈诉。

该项目已有国度参考品,应利用国度参考品举行注册查验。

四、阳性判别值确定材料

阳性判别值确定材料次要指对报告产品病毒核酸检测的Ct值,即后果判别的临界值举行确认的材料。阳性判别值研讨材料样原本源应思索差别年事、性别、地区等要素,尽大概思索样原本源的多样性、代表性。如存在判断值灰区,应提供灰区确实认材料。应阐明所选择阳性判别值研讨办法的公道性,阈值设置应迷信公道。提供内标值确实定办法和研讨材料。

五、次要原质料研讨材料

此产品的次要原质料包罗引物、探针、酶、dNTP、核酸分散/纯化组分(若有)、质控品、参考品等。应提供次要原质料的选择与泉源、制备历程、质量尺度等相干研讨材料、质控品的定值实验材料等。如次要原质料为企业自制,应提供其细致制备历程;如次要原质料源于外购,应提供材料包罗:选择该原质料的根据及比拟挑选实验材料、供货方提供的质量尺度、出厂检定陈诉,以及该原质料到货后的质量查验材料。

1.引物和探针:应详述引物和探针的设计准绳,提供引物、探针核酸序列、靶序列的基因位点及两者的对应状况。发起每种病毒设计两套或多套引物、探针以供挑选,经过序列比对和实验等方法,对病毒举行包涵性和特异性(如交织反响)的评价,选择最佳组合,并提交挑选的研讨数据。引物、探针的质量尺度应至多包罗序列正确性、纯度、浓度及功效性实行等。

2.脱氧三磷酸核苷(dNTP):包罗dATP、dUTP、dGTP、dCTP、dTTP,应提供对其纯度、浓度、功效性等的细致验证材料。

3.酶:必要的酶次要包罗DNA聚合酶、逆转录酶、尿嘧啶DNA糖基化酶等,应辨别对酶活性、功效性等举行评价和验证。

4.试剂盒内质控品

试剂盒的质控系统经过设置种种试剂盒质控品来完成,其应到场样本处置、核酸的平行提取检测的全历程。以对整个提取和PCR扩增历程、试剂/设置装备摆设、交织净化等关键举行公道质量控制。报告材料应对试剂盒质控品有关质料选择、制备、定值历程、浓度范畴等实验材料细致阐明。企业应对证控品的检测后果(如Ct值)做出明白的范畴要求。

4.1阴性子控品应不含试剂盒所检测的靶序列。

4.2阳性子控品

阳性子控品可用1~2个病毒株为代表,应含有自然的某人工分解的包括试剂盒可检测靶序列(如假病毒)。

 5.内比较(内标)可以对管内克制招致的假阴性后果举行质量控制,应与靶核酸一同提取及扩增,请求人应对内比较(内标)的引物、探针设计和模板浓度做准确验证,既要包管内标荧光通道呈分明的阳性曲线又要只管即便低落对靶基因检测形成的克制。对内比较的检测后果(如Ct值)亦应做出明白的范畴要求。发起迷信设置内比较(内标),看待侧样本的取样质量、试剂的反响系统举行监控。

6.企业参考品

应依据产品功能验证的实践必要自行设定企业外部参考品,包罗阳性参考品、阴性参考品、检测限参考品、反复性参考品。

阳性参考品应偏重思索差别泉源的病毒样本和滴度要求,应至多选取差别泉源的5个病毒样本。

阴性参考品则次要触及对交织反响的验证状况,发起包罗冠状病毒(HKU1、OC43、NL63、229E)、SARS冠状病毒(可接纳假病毒)、MERS冠状病毒(可接纳假病毒)、流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒、腺病毒等。

检测限参考品的浓度程度可接纳90~95%阳性检出程度或略高于最低检测限的程度,如100%阳性检出程度。检测限参考品的浓度确定应迷信公道。

反复性参考品发起包罗高、低两个浓度的样本,此中一个浓度应为最低检出限左近的浓度。

请求人应对外部参考品的泉源、型别判定、病毒滴度等信息举行准确的实验验证,并提交细致的验证材料。

六、次要消费工艺及反响系统的研讨材料

1.介绍产品次要消费工艺,可用图表方法表现,并阐明次要消费工艺确实定根据。

2.反响原理介绍。

3.详述样本收罗、样本处置方法的选择和设置,提供相干的研讨材料。

(1)研讨样本收罗工夫点的选择:能否受病程、临床症状、用药状况等要素的影响。

(2)研讨对采样拭子及样本保管液的要求:对采样拭子的材质要求(包罗对拭子头和拭子杆的要求),保管容器要求,裂解液、保管液身分、浓度、利用量的要求等。

4.确定最佳反响系统的研讨材料,包罗样本用量、种种酶浓度、引物/探针浓度、dNTP浓度、阳离子浓度及反响各阶段温度、工夫、循环数等发起在包管核酸提取纯度的状况下只管即便扩展总反响系统和加样量。

5.差别实用机型的反响条件假如有差别应辨别详述,并提交验证材料。

6.如报告产品包括核酸分散/纯化试剂,应提交对核酸分散/纯化历程举行工艺优化的研讨材料。

七、波动性研讨材料

波动性研讨材料次要触及两局部内容,报告试剂的波动性和实用样本的波动性研讨。

1.报告试剂的波动性次要包罗及时波动性(无效期)、开瓶波动性及冻融次数限定等研讨,请求人可依据实践必要选择公道的波动性研讨方案。波动性研讨材料应包罗研讨办法确实定根据、详细的实行方案、细致的研讨数据以及结论。关于及时波动性研讨,应提供至多三批样品在实践贮存条件下保管至制品无效期后的研讨材料。

2. 实用样本的波动性

思索到病毒RNA极易被降解的特征,企业也应对样本波动性举行研讨,包罗收罗后经处置样本,参加裂解液/保管液的样本惯例病毒灭活的样本,保管条件包罗冷藏和冷冻两种条件。如产品实用拭子、痰液和灌洗液等差别的样本范例,此中搅扰物质存在较大差别,大概对病毒RNA降解的影响差别,发起对每种样本范例均举行研讨。适于冷冻保管的样本还应对冻融次数举行评价。

关于此类试剂,如核酸提取液不克不及立刻举行检测,则还需对核酸提取液的保管条件和波动性举行研讨。

八、临床证据

新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂临床实验应按要求在三家以上临床实验机构举行(含各级疾病防备控制中心),经过稽核试剂对来自临床病例样本的检测后果与已上市同类产品检测后果以及病例的临床确诊/扫除后果举行比拟,以验证产品临床功能。已上市同类产品检测后果可获取自病例临床诊疗历程。如临床实验机构条件容许,保举多家消费企业的试剂盒在相反的临床实验机构配合验证。

1.临床实验比拟办法

临床实验应选择已上市的同类产品作为比拟产品,同时,思索稽核试剂检测后果与临床确诊/扫除后果举行比拟。国度卫生安康委员会公布的《新型冠状病毒熏染的肺炎诊断方案》及《天下各省(区、市)首例新型冠状病毒熏染的肺炎病例确认步伐》等文件,病例确认办法应根据上述文件中划定的各省份首例病例确认步伐及各省第二例及当前的熏染病例确实认步伐订定。不发起接纳某一实验所在的单次实验后果作为确认后果。既往病例确实认后果可提交该病例的既往确认数据。

2.临床实验入组人群

临床实验的入组人群应为产品的预期实用人群,该产品的实用人群为新型冠状病毒熏染肺炎的疑似病例,国度卫生安康委在差别工夫阶段公布了差别版本的《新型冠状病毒熏染的肺炎诊疗方案》,请求人在举行临床实验时应思索事先现行方案对“疑似病例”的界说,依照该界说入组病例举行临床研讨,临床实验历程中应包罗确诊及扫除病例。临床实验中应入组局部后期新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测阴性确实诊病例,该局部病例可接纳回忆性研讨,临床验证的样本包罗:后期核酸检测剩余样本及病例确认所用样本。同时,临床实验还可入组局部排除断绝和切合出院尺度的病例,该局部病例阴性确实认应满意现行的《新型冠状病毒熏染的肺炎诊断方案》中关于排除断绝和出院尺度的要求。

3.临床实验样本范例

试剂盒样本收罗发起依照《新型冠状病毒熏染的肺炎实行室检测技能指南》举行。临床实验历程中,如临床实验历程中样本的确难以取得,经提取后的核酸提取液亦可作为样本举行临床实验。如接纳核酸提取液举行临床实验,发起临床实验中明白该核酸提取液对应的样本范例及样本保管液/采样液(如实用),同时明白核酸提取试剂盒,临床前应对临床实验中所触及的样本范例、样本保管液及核酸提取试剂举行充实的功能评价,临床实验中所用样本保管液及核酸提取试剂应严厉满意稽核试剂及比拟试剂要求。

临床实验中如病例可取得多个样本范例,如上、下呼吸道标本等,验证历程中发起至多包罗上呼吸道样本和下呼吸道样本。临床实验差别样本范例及核酸提取液波动性应满意稽核试剂及比拟试剂的要求。

4.临床实验样本量

新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测试剂为定性产品,临床实验历程样本量应可以满意评价临床评价目标的要求,如临床敏捷度、临床特异度、阴阳性切合率等,发起入组确诊病例不少于200例,扫除病例不少于300例,同时入组局部排除断绝和切合出院尺度的病例。入组病例中差别临床严峻水平、差别病程阶段的患者均应有肯定的例数。如报告试剂包括差别样本范例,发起每种样本范例独自统计满意统计学要求。

5.临床实验后果的统计剖析

此类产品的临床实验目标在于验证报告产品与临床已使用的同类产品及临床参考尺度的分歧性,统计剖析一样平常以2×2表的情势对后果举行总结,并据此盘算报告产品与比拟产品的切合率、临床敏捷度、临床特异度及其相信区间。应将稽核试剂与比拟试剂检测后果分歧性及稽核试剂检测后果与临床确认/扫除后果的分歧性辨别举行统计剖析,以评价产品临床功能。

临床实验发起对入组人群的生齿学举行剖析,包罗年事、性别、临床诊断配景、临床分型等。临床实验中应对差别的人群举行分层统计,如确诊/扫除病例、后期新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测阴性确实诊病例、及排除断绝和切合出院尺度病例等。针对后期新型冠状病毒2019-nCoV核酸检测阴性确实诊病例后期阴性样本、及排除断绝和切合出院尺度病例样本,应形貌稽核试剂针对新型冠状病毒2019-nCoV核酸的检出率。临床实验中包括差别样本范例的,应在总样本数(百般本范例总和)举行统计剖析的底子上,每个样本范例辨别举行统计剖析。

临床实验中一切纷歧致后果均应联合患者的盛行病学配景、临床症状、疾病转归等信息举行充实的剖析。

6. 临床证据的情势要求

请求人应依照《体外诊断试剂注册办理措施》、《关于发布体外诊断试剂注册报告材料要求和同意证明文件款式的通告》等法例文件要求提交各机构伦理检察意见、临床实验方案和临床实验陈诉以及临床实验总结陈诉。

临床实验数据汇总表作为临床实验陈诉的附件提交。数据表中应包罗检测病例的编号、年事、性别、样本范例、临床诊断配景信息、稽核试剂检测后果(含各基因的Ct值)、比拟试剂的检测后果(各基因的Ct值)、新冠病毒熏染确实诊或扫除后果等,如临床实验中所用样本为核酸提取液,应明白该样本样本保管液(如触及)、核酸提取试剂等。临床使用的数据会合每一病例编号应可以溯源。详细内容详见附表。

 

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